细胞周期
一、实验原理
细胞在有丝分裂过程中DNA加倍（n--2n）。
二、实验步骤（PI染色法）
1. 取1块24孔板，接种指数生长期目的细胞：100000个/孔，设置NC对照组及实验组，3复孔/组；
2. 取lipofilter约2.0ul，以RPMI1640培养基（含2% FBS）48ul混匀，室温静置5min；
3. 取制备的siRNA约50pmol（2ul），以RPMI1640培养基（含2%FBS）46ul混匀；
4. 将步骤2与3准备的2管溶液混合，轻轻混匀，加入步骤1的细胞中；
5. 培养6h后，更换新鲜RPMI1640培养基（含2%FBS）500ul，继续培养；
6. 培养48h后，1200rpm离心5min收集细胞，并以预冷PBS洗涤2次；
7. 加入预冷70%乙醇，置于4℃固定过夜；
8. 以1200rpm离心5min收集细胞，并以1mlPBS洗涤1次，加入500ul PBS（含50ug/ml PI, 100ug/ml RNaseA, 0.2% Triton X-100），4℃避光孵育30min；
9. 上机流式分析细胞周期，细胞数2-100000个，结果以Modfit分析。
三、注意事项
所有操作在冰上进行。
流式检测细胞周期示例图
细胞在有丝分裂过程中DNA加倍（n--2n）。
二、实验步骤（PI染色法）
1. 取1块24孔板，接种指数生长期目的细胞：100000个/孔，设置NC对照组及实验组，3复孔/组；
2. 取lipofilter约2.0ul，以RPMI1640培养基（含2% FBS）48ul混匀，室温静置5min；
3. 取制备的siRNA约50pmol（2ul），以RPMI1640培养基（含2%FBS）46ul混匀；
4. 将步骤2与3准备的2管溶液混合，轻轻混匀，加入步骤1的细胞中；
5. 培养6h后，更换新鲜RPMI1640培养基（含2%FBS）500ul，继续培养；
6. 培养48h后，1200rpm离心5min收集细胞，并以预冷PBS洗涤2次；
7. 加入预冷70%乙醇，置于4℃固定过夜；
8. 以1200rpm离心5min收集细胞，并以1mlPBS洗涤1次，加入500ul PBS（含50ug/ml PI, 100ug/ml RNaseA, 0.2% Triton X-100），4℃避光孵育30min；
9. 上机流式分析细胞周期，细胞数2-100000个，结果以Modfit分析。
三、注意事项
所有操作在冰上进行。
流式检测细胞周期示例图
