一、实验概述
Transwell 是一种实验技术,主要用于研究细胞侵袭、细胞迁移、共培养、细胞趋化等。这项技术的主要材料是 Transwell 小室( Transwell chamber , Transwell insert ),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对 Transwell 会有不同的命名,而不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。
但无论是何种外形,其关键部分都是一致的,那就是杯子底层的一张有通透性的膜 ,而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔,孔径大小有 0.1 - 12.0μm ,根据不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜 ( polycarbonate membrane )。
将 Transwell 小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
Transwell 原理图
二、实验应用
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养 、细胞趋化 、细胞迁移 、细胞侵袭等多方面的研究。 当然不同细胞其体积不同,具体选择时要考虑到细胞大小。这里我们以最见的侵袭、迁移为例,描述transwell实验:
(1)transwell细胞迁移实验
常用 8.0 、 12.0μm 膜,上室种肿瘤细胞,下室加入 FBS 或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
(2)transwell细胞侵袭实验
常用 8.0 、 12.0μm 膜,原理与肿瘤细胞迁移 实验类似。
上室种肿瘤细胞,下室加入 FBS 或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,但与肿瘤细胞迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶 ,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶( MMPs )将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
Transwell检测细胞侵袭