coIP
免疫共沉淀coIP实验
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。
coIP实验过程：
1.用5ml枪头刮取细胞表面，然后抽吸悬液转移到15ml细心管中，4℃，1200rpm,离心3min中。
2.加入1ml冰冷的PBS重悬细胞，1200rpm,4℃离心3min.
3.弃去上清，加入1ml体积的IP dillution buffer,然后votex3次，每次votex震荡混匀后静止置2min,裂解过程中同时加入PMSF（250mmol,1:250加入）和PIC（100mmol,1:100加入），总共裂解10min,便于细胞充分裂解完全。
4.转移至1.5ml离心管中，12000rpm,4℃离心10min中。
5.将上述上清留取50ul用于input对照，剩下的上清分别分装2管（标记HSP27抗体样品管，IgG抗体样品管）保存负80度或用于抗体孵育实验。
6.取100ul的琼脂糖珠，加入1ml体积的IP buffer,4000r/30s,清洗一次，后弃去上清。
7.将上清转移至含有琼脂糖珠的EP管中，4℃磁力架上摇摆过夜。
8.离心，加1ml的IP buffer后4000r/30s,移液枪吸，弃上清，洗涤4次，洗干净，每次吹打10次，轻柔混匀。
9.洗涤完成后，加入40ul的loading buffer.
10.100℃煮样5-10min,然后保存负20或者用于Western blot检测。
11.Western Blot检测目标蛋白。
coIP样品WB检测示意图
