一、实验原理
CCK-8（Cell Counting Kit-8），就是进行细胞计数的一种试剂盒。CCK-8实验主要用于检测细胞增殖、细胞毒性相关的实验。
CCK-8试剂盒中最主要的化学药品是WST-8，化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的核心基团和MTT是一样的，是MTT的升级版本。在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色也会越深。
二、CCK8的用途
CCK-8实验主要用于以下研究：
1. 细胞增殖
2. 药物筛选
3. 细胞毒性测定
4. 肿瘤药敏试验
三、CCK8的优点：
1. 酚红和血清对CCK-8法的检测不会造成干扰；
2. 细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。
三、实验步骤：
1. 在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2. 向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4. 向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7. 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
计算公式：
细胞存活率 = [（实验孔 — 空白孔）/ （对照孔 — 空白孔）] × 100%
抑制率 = [（对照孔 — 实验孔） / （对照孔 — 空白孔）] × 100%
实验孔 （含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质）
对照孔 （含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质）
空白孔 （不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8）
五、注意事项
1. 第一次做实验时，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK-8 试剂后的培养时间。
2. 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不一致。
3. 培养板周围一圈孔培养液容易挥发，为减少误差，建议培养板周围的四边每孔只加培养基。
4. 建议采用多通道移液器，减少平行孔间的误差，加 CCK-8 时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，干扰 OD 值。
5. 若细胞培养时间较长，培养基颜色或 pH 发生变化，建议更换培养基后再加 CCK-8，含有酚红的培养基不影响测定。
6. CCK-8 反复冻融会增加背景值，干扰实验测定。
CCK-8检测细胞增殖
