原代细胞分离与培养-励茨（上海）生物科技有限公司

原代细胞分离与培养

原代细胞的分离与培养是细胞生物学的基础工作。凡是来源于胚胎、组织、器官、外周血等经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞被称为原代细胞。

原代细胞的分离

体液样本原代细胞的分离

血液、羊水、腹水等液体材料的原代细胞分离比较简单，采用低速离心（1000r/min）10分钟，使不同细胞分层，根据需要获取目的细胞。

组织样本原代细胞的培养

组织样本的细胞间结合紧密，为了将组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，主要有2种方法：机械分散法和消化分离法。

（一）机械分散法

该方法也叫物理裂解法，简单快速，但是对细胞分散效果比价差，适用于纤维成分少的软组织。

（二）消化分离法

1. 酶消化分离法

这种方法常用的是胰蛋白酶和胶原酶。

胰蛋白酶是一种胰脏制品，对蛋白质有水解作用，主要作用于赖氨酸或精氨酸相连的肽键，使细胞间质中的蛋白质水解而使细胞分散开。

胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用，适用于消化纤维性组织、上皮组织以及肿瘤组织，对细胞间质有很好的消化作用。

消化分离法的总体流程：剪切、漂洗、消化、漂洗、机械分散。

2. 非酶消化法

也叫EDTA消化法，EDTA是一种非酶消化物，又称螯合剂。常用不含钙、镁离子的PBS配成0.02%的工作液，对一些组织，尤其是上皮组织，的分散效果很好。该化学物质能与细胞上的钙、镁离子结合形成螯合物，利用结合后的机械力使细胞变圆，从而分散细胞或者使贴壁细胞从瓶壁上脱离。

原代细胞培养

原代细胞的培养也叫初代培养，是从供体取得组织细胞在体外进行首次培养，是建立细胞系的第一步，是基础医学科研中一项基本技术。原代细胞最接近和最能反映体内生长特性，适用于药物敏感性实验、细胞分化等实验研究。

原代细胞由于种类众多，分离方法各异，培养特性不一等因素，其分离和培养操作起来有一定难度，励茨生物经过多年科研服务积累，在原代细胞分离与培养方面积累了大量经验，目前已经在人、大鼠、小鼠等物种上成功分离培养原代细胞100余种。不仅能做原代细胞的分离和培养，还包括原代细胞纯化、建系和永生化。